;20世纪 80年代发展起来的一坝利用流式细胞仪进行分析的新技术。流式细胞术集激光术、微电脑、单克隆抗体技术、细胞色素化学于一体,形成了快速、准确的分析和细胞分选技术方法。FCM在临床和基础研究中的价值主要体现于免疫表型分析、DNA含量分析和细胞分选三个方面。其中免疫表型分析在细胞免疫功能测定中起着重要作用。原理是用细胞表面特异性单克隆抗体与细胞作用,再利用荧光结合的第二抗体与之作用。通过抗原抗体反应,使阳性细胞标上荧光,此为间接标记法;或将特异性单抗先标记上荧光再直接与细胞结合发光,此为直接标记法。当细胞流经流式细胞仪,激光束(488urn)对高速通过的细胞流照射,使荧光染料产生不同波长的散射光,光信号收集后经由PMT(光电倍增管)放大并加以分析处理,在短时内可获取细胞大小、核质比、荧光强度和阳性百分比等数据,较之荧光显微镜分析具有客观、快速、信息量大,统计处理准确等优点。应用FCM对细胞免疫功能的检测主要用于:
(1)对细胞分群和细胞亚群的分析 利用CD45/CD14可以分出外周血中的白细胞和单核细胞,在白细胞内利用 CD3、CD19、CD20、CD3一/(CD16+56)十等标记进一步可分出T、B淋巴细胞和NK细胞等。在T细胞内又有CD4/CDS标志的T辅助/诱导和T抑制/杀伤亚群,利用 CD4/CD29、CDS/CD28标志可以将T4、TS进一步分出谷亚群。
(2)检测淋巴细胞的活化CD3/HLA-DR、CD3/CD25、CD69等都是活化T淋巴细胞的特异性标记,另有C17单抗是活化的细胞毒T淋巴细胞的标志物。其比值的改变对病情监测,疗效判断有重要的指导意义。
(3)一些特殊的标志如CD4/CD8比值是AIDS、自身免疫性疾病病程监测的重要指标。q
常用免疫表型分析单抗及正常值见表分3。
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